深圳科软KR仿手工甩干式不堵孔洗板机之PCR-ELISA技术在转基因食品检测中的应用

       不吸液：删除吸液针等吸液系统，利用旋转和重力去液。

       无污染：水平放板，旋转向下甩液，保证最大程度去液。独特锅底状接液设计，极难反溅。独有的防污染预处理洗板程序。

       免拍板：微孔内无残留，洗好后不用人工拍板。免除拍板给环境和使用者造成的不利影响。

       不堵孔：无吸液针，极大地降低堵孔风险。注液针防堵孔处理，实现注液针不堵孔。闲时管路自动清洗，避免结晶堵塞。开关机自动维护，保证管路内畅通无阻。

       不撞针：注液针不移动，与微孔板保持足够距离，有效保护酶标板和孔内包被。

       可条洗：每块板可以任选条数进行清洗，节省洗液，保护环境。

       速度快：一次可洗1—6块板，KR306洗好6块板约4分钟。

P        C R 技术是一种基因扩增技术，它具有快速、灵敏、特异的特点，已成为分子生物学检测和基因工程的一项强有力的工具。随着P C R 技术的发展及应用，与P C R 相关的技术也得到了突飞猛进的发展。其中，N iemeyer等人于1997年创建的P C R - E L I S A技术就是其中之一。该技术是一种将P C R 高效性与E L I S A高特异性结合在一起的转基因检测方法。
—、PCR-ELISA技术基本原理
         其基本原理是利用共价交联在P C R 管壁上的寡核苷酸作为固相引物，在T a q酶作用下，以目标核酸为模板进行扩增，产物一部分交联在管壁上，为固相产物，一部分游离于液体中，为液相产物。将固相产物用于E L I S A检测：以适当比例与用生物素或地高辛标记的探针进行杂交，再加入碱性磷酸酯酶( A P )标记的抗生物素或抗地高辛抗体，最后加入底物溶液显色，通过酶标仪读取数值，而对于液相产物则可同时通过凝胶电泳进行分析。
       对转基因食品检测而言，报告基因、启动子和终止子的检测是当前的重要手段，N PTII、C a M V 3 5 S启动子、N O S 终止子等1 0多种基因或基因片段被广泛存在于转基因植物中。
       传统的P C R 理论上能用于所有这些转基因产品的检测，但在对P C R 产物进行凝胶电泳分析的过程中，如果由于实验试剂或设备的污染，则可能会出现假阳性现象，或者由于T a q酶活力不够、引物设计的不合理，也会造成假阴性现象。而E L I S A检测虽然是一种特异性很强的蛋白检测方法，但对于不表达或是表达量很少的目的基因却无法检测到。与以上检测手段相比，P C R - E L I S A的优点在于：① 快速，灵敏度高。对于固相产物，以适当比例和用生物素或地高辛标记的探针进行杂交，比起常规的P C R 和E L I S A检测法，P C R - E L I S A检测法的灵敏度可达0 . 1 %，足以达到欧盟的要求(转基因检测阈值为1 % )。② 特异性强，可靠性好。P C R - E L I S A方法在P C R 结束后用标记探针与管壁上的固相产物杂交，这样就提髙了检测的特异性，而且结果的判定通过紫外分光光度计或酶标仪，以数字的形式输出。与此同时，液相产物通过凝胶电泳对进行检测。这两次检测有效地避免了假阳性出现，提高了检测结果的可靠性。③ 操作简便、安全，且可以进行半定量检测。P C R - E L I S A方法所需仪器简单、易于操作，杂交检测可自动化，避免了有毒物质E B 的使用，适合大批量检测。且如果在检测过程中，以一系列浓度梯度的阳性标准样品为参照，绘制吸光值O D 与转基因含量的标准曲线图，便可以计算出待测样品转基因的含量，是一种值得推广的转基因食品检测方法。

二、PCR-ELISA技术基本步骤其基本的操作步骤主要包括：
       ①固相引物的包被：是指利用特殊试剂将5'磷酸化或氨基化的引物特异性地固定在附着物上，它是固相扩增的前提，也是杂交检测的基础。
       ② P C R 扩增：在包被寡核苷酸的管内进行P C R 扩增，扩增条件因目的片段而异。固相产物与液相产物的量由两相引物的浓度比值决定。
       ③ E L I S A检测：变性后的固相产物与探针杂交，杂交温度因探针而异，一般在45 °C〜50 °0都能得到较好的效果。杂交后洗掉非特异性结合的探针，加人碱性磷酸酯酶标记的抗地高辛抗体使之与探针上的地高辛结合，P N P P (磷酸对硝基苯酯）显色一段时间后，通过酶标仪读数。去掉空白对照，高于1. 0 为阳性，低于0. 1 为阴性。