深圳科软KR仿手工甩干式侧立式洗板机之金黄色葡萄球菌的ELISA检测方法

       科软仿手工甩干式全自动洗板机是传统洗板机和传统甩干机的有机组合的一体机。相对传统洗板机而言，其最大特点是：1、不用人工拍板；2、不会堵针；3、故障低；4速度快。

       不吸液：删除吸液针等吸液系统，利用旋转和重力去液。

       无污染：水平放板，旋转向下甩液，保证最大程度去液。独特锅底状接液设计，极难反溅。独有的防污染预处理洗板程序。

       免拍板：微孔内无残留，洗好后不用人工拍板。免除拍板给环境和使用者造成的不利影响。

       不堵孔：无吸液针，极大地降低堵孔风险。注液针防堵孔处理，实现注液针不堵孔。闲时管路自动清洗，避免结晶堵塞。开关机自动维护，保证管路内畅通无阻。

       不撞针：注液针不移动，与微孔板保持足够距离，有效保护酶标板和孔内包被。

       可条洗：每块板可以任选条数进行清洗，节省洗液，保护环境。

       速度快：一次可洗1—6块板，KR306洗好6块板约4分钟。

     金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列无芽孢，无鞭毛，不能运动。该菌在自然界中分布广泛，如空气、水、土壤、饲料和一些物品上，是最常见的化脓性球菌之一，食品受其污染的机会很多。金黄色葡萄球菌食物中毒是由其肠毒素引起的，目前巳确认的肠毒素至少有八4 、(：1、(：2、(：3、0 、£ 和？8 个型。由金黄色葡萄球菌肠毒素引发的中毒暴发事件，近年来首推2 0 0 0年日本“雪印奶粉”事件，14 0 0 0多人受感染。因此，金黄色葡萄球菌的检测方法研究多集中于肠毒素的检测方法上。龙军等建立双抗体夹心E L I S A 法检测葡萄球菌B 型肠毒素，用于定量检测人工污染食品中金黄色葡萄球菌肠毒素B ( S E B )。采用生物素-链亲素系统放大的双抗体夹心酶联免疫吸附方法，以兔抗葡萄球菌肠毒素B ( S E B )多克隆抗体作为包被抗体，以生物素标记的抗S E B 单克隆抗体2 D 作为第二抗体进行测定。结果在0. 078 y g / L - l O . O O O fxg/L的浓度范围内，S E B 标准品浓度与吸光度值线性关系良好，相关系数为r=0. 987 6，平均变异系数为4. 9 9 % 。该方法灵敏度高、准确性好、稳定性强，而且简便、快速，适用于食品样品中S E B 的定量测定。下面介绍金黄色葡萄球菌肠毒素直接酶联免疫检测方法。
一、原理
      金黄色葡萄球菌肠毒素酶联免疫方法检测原理，采用直接免疫法。微量滴定板上孔A - E和H 涂有一层特殊的抗体与葡萄球菌肠毒素A 、B 、C 、D 、E 相对应，孔F ，G 作为对照组，且涂有非免疫动物抗体。加样品液从孔A 到G 和阳性物到孔H ，如有存在毒素，毒素将会被结合在特殊抗体上，没有被抗体结合的物质将被冲洗掉。被结合的毒素通过特殊的带有过氧化物酶的抗体混合物检测。酶底物和发色剂加人到孔且培养，结合的酶复合物从无色发色剂转变成蔚蓝色产物，加终止液导致颜色从蓝色变为黄色。测试在450 nm 光度下进行，吸收值与样品中SET浓度呈正相关。测试结果的确认:Cut-off值的确定，对于孔F和G 阴性对照平均O D值由各自样品确定。阴性对照的平均值加上0 .1 5得到Cut-off。在450 nm样品吸收值小于Cut-off为阴性，样品吸收值大于Cut-off为阳性。
二、操作方法
      按试剂盒提供的方法进行样品的处理，取100 f A 制好的样品加至微量滴定板A - G 孔，阳性对照100 加至H 孔，混勻，室温培养1 h ，缓冲液冲洗三次以上；每孔加底物和发色剂各50 /uL,混匀，黑暗室温下培养30 min;每孔加终止液100 juL混匀，60 m i n内在450 nm条件下测试吸光度值，读取最终结果。