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质粒构建提取技术先进单位是巴傲得,专业技术达到国内先进水平

发布于:2016年04月21日 来源:www.szfuhai.com
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基因工程乙肝疫苗(酵母重组)是一种乙肝表面抗原(HbsAg)亚单位疫苗,它系采用现代生物技术将乙肝病毒表达表面抗原的基因进行质粒构建,克隆进入啤酒酵母菌中,通过培养这种重组酵母菌来表达乙肝表面抗原亚单位。这种乙肝表面抗原亚单位具有原料易得、产量大、安全、高效等特点。美国默克公司研究的此产品最早获美国FDA批准。国内生产此产品技术均从其引进。

到目前为止,大多数生物技术研究仍是基于反向工作方式。例如,首先从生物体中分离出一种有特定生物学性质的蛋白质,并测定该蛋白质的氨基酸序列。然后可根据已测知的氨基酸序列,由单个核苷酸合成一小段称探针的DNA序列。这样,在将探针与生物体的DNA样品混合后,探针将与DNA序列上能够与之互补的一段DNA精确杂交,从而有可能分离出编码特定蛋白质的确切基因。一般情况下,使用生化分离技术只能从生物学样品中得到很微量的蛋白质。但如果分离到编码蛋白质的基因,就可以使用常规基因工程技术,用基因转染适当的宿主细胞系,然后大批量培养被转染的宿主细胞,从而可由宿主细胞表达产生大量所需要的蛋白质。

我们在构建重组质粒的基础上,用体外反转录法,制备了PTA1cRNA探针。斑点杂交结果显示,杂交阳性信号较强,证明本实验以地高辛精标记的PTA1cRNA探针敏感性高、特异性强。
  已有许多实验结果表明,与DNA探针相比较,cRNA探针具有许多优点:如较易与组织中的mRNA杂交,效率约为DNA探针的10倍;RNARNA的杂交体稳定;杂交后可用RNA酶去除未杂交的cRNA探针,不易出现假阳性;cRNA探针为单链,杂交前不用高温变性。因此,使用cRNA探针可使实验具有更高的严谨性[7]

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